Altogen Biosystems轉(zhuǎn)染試劑的相關(guān)知識(shí)普及
2019-09-17 點(diǎn)擊：2132
隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷深入，DNA轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)實(shí)驗(yàn)工具。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生命科學(xué)前沿研究中，應(yīng)用越來(lái)越廣泛。Altogen Biosystems轉(zhuǎn)染試劑能夠利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒DNA，通過(guò)直接穿膜或膜融合的方法，將外源DNA分子導(dǎo)入真核細(xì)胞，使外源基因表達(dá)，從而針對(duì)某個(gè)基因和蛋白質(zhì)的功能進(jìn)行一系列生物學(xué)功能研究的方法。
轉(zhuǎn)染效率的確定，常用的是使用熒光定量PCR、熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)等方法。標(biāo)準(zhǔn)無(wú)疑是檢測(cè)目標(biāo)基因的mRNA水平，因?yàn)檗D(zhuǎn)染試劑不僅要把質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞，還應(yīng)及時(shí)把轉(zhuǎn)入細(xì)胞的DNA釋放出來(lái)，發(fā)揮基因表達(dá)或基因調(diào)控的作用。通過(guò)熒光顯微鏡判斷轉(zhuǎn)染效率至少存在兩方面的問(wèn)題：1、熒光顯微鏡看到的熒光點(diǎn)可能是非特異吸附的結(jié)果；2、有些轉(zhuǎn)染試劑能夠?qū)①|(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，但不能充分釋放，導(dǎo)致基因表達(dá)或基因調(diào)控效率并不高。因而，判斷Altogen Biosystems轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率的金標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該是熒光定量檢測(cè)mRNA水平，僅靠觀察熒光顯微鏡判斷轉(zhuǎn)染效率、選擇轉(zhuǎn)染試劑往往會(huì)導(dǎo)致誤判，影響實(shí)驗(yàn)的進(jìn)展。
質(zhì)粒質(zhì)量：請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8～2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。
細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒(méi)有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。
